前言：實(shí)時(shí)無標(biāo)記動(dòng)態(tài)細(xì)胞分析技術(shù)（RTCA，Real Time Cellular Analysis）可以檢測(cè)貼壁細(xì)胞的電極阻抗，從而獲得細(xì)胞變化的參數(shù)，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、伸展、形態(tài)變化、死亡和貼壁等。人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468為貼壁細(xì)胞，先接種癌細(xì)胞，待細(xì)胞到達(dá)對(duì)數(shù)期，添加NK細(xì)胞，監(jiān)測(cè)癌細(xì)胞的信號(hào)變化，從而獲得NK細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的殺傷效果。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
監(jiān)測(cè)NK細(xì)胞對(duì)實(shí)體瘤細(xì)胞的殺傷效果。
實(shí)驗(yàn)材料
細(xì)胞及試劑
關(guān)鍵儀器設(shè)備
實(shí)驗(yàn)步驟
細(xì)胞準(zhǔn)備
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468培養(yǎng)一代后，收獲計(jì)數(shù)，按照每孔10000個(gè)接種至RTCA檢測(cè)耗材中，共接種10孔。
凍存的NK細(xì)胞（保存于-80℃，一周），37℃水浴復(fù)蘇，檢測(cè)數(shù)量與純度備用。
NK細(xì)胞殺傷
接種人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468后，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，待曲線明顯升高時(shí)，分別接種不同效靶比的NK細(xì)胞，繼續(xù)監(jiān)測(cè)。接種數(shù)量及效靶比如下：
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
NK細(xì)胞復(fù)蘇流式結(jié)果
RTCA cell index分析細(xì)胞殺傷
接種人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468后，25h左右Cell Index曲線斜率相當(dāng)，說明細(xì)胞在穩(wěn)步增殖狀態(tài)，此時(shí)開始添加NK細(xì)胞，效靶比分別為1：1、4：1、8：1、16：1，對(duì)照組添加等量培養(yǎng)基，每孔有2個(gè)平行對(duì)照。
可以看到，對(duì)照組癌細(xì)胞繼續(xù)穩(wěn)步增殖，于90h左右到達(dá)平臺(tái)期；效靶比1：1、4：1殺傷后癌細(xì)胞仍可增殖，殺傷效果不佳；效靶比為16：1時(shí)，癌細(xì)胞幾乎全部被殺死，將近70h+細(xì)胞無任何增殖。
細(xì)胞殺傷后的圖像對(duì)比
人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468為貼壁生長(zhǎng)，NK細(xì)胞懸浮或半貼壁生長(zhǎng)，鏡下易成團(tuán)，且NK細(xì)胞體積比癌細(xì)胞小。
通過鏡下觀察圖像可以看到，效靶比1：1組可看到細(xì)胞比較滿，效靶比4：1組細(xì)胞呈斑塊狀，一些區(qū)域完全沒有細(xì)胞。效靶比8：1組細(xì)胞細(xì)胞更少一些，只有少數(shù)區(qū)域長(zhǎng)了細(xì)胞，大部分區(qū)域沒有細(xì)胞生長(zhǎng)；而效靶比16：1組幾乎找不到癌細(xì)胞生長(zhǎng)，可看到NK細(xì)胞結(jié)團(tuán)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
NK細(xì)胞凍存復(fù)蘇后仍有很高的活率（98.8%）及很高的純度（95.3%）
通過RTCA實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)，凍存復(fù)蘇NK細(xì)胞在效靶比為16：1時(shí)，對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468起到了非常好的殺傷效果。
相比于新鮮NK細(xì)胞的殺傷效果（效靶比4：1時(shí)細(xì)胞全部殺傷），凍存NK細(xì)胞的殺傷能力大幅降低。
