| 適用范圍 | 試劑 |
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| 使用方法 | （一） 細胞凍存 1. 取對數生長期的細胞，去除舊培養液，加入 PBS 清洗細胞； 2. 去除 PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面） 室溫孵育 2~3 min，把單層生長細胞消化下來； 3. 加入雙倍體積的完全培養基或胰酶終止劑終止細胞消化（如果凍存細胞為懸浮細胞按照步驟 4-8 進行操作）； 4. 將消化后的細胞懸液或者懸浮細胞液轉移至離心管中，進行細胞計數； 5. 室溫 1000 rpm 離心 5 min；棄掉上清液； 6. 加入適量 4℃預冷的無血清細胞凍存液重懸細胞沉淀，制成細胞懸液（按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量，推薦凍存密度：5x105 至 1x107cells/mL； 7. 將細胞分裝入凍存管中，每管 1～1.5 ml； 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者等信息； 8. 針對常規腫瘤細胞：將凍存液重懸后的細胞直接放入-80℃冰箱，過夜后轉入至液氮罐中 長期保存。針對難養或珍貴細胞：將凍存液重懸后的細胞放入程序降溫盒，或者程序降溫后再放入-80℃冰箱，過夜后轉入至液氮罐中長期保存。 （二） 細胞復蘇 1. 將水浴鍋溫度調至 37℃，取出凍存管快速置于水浴鍋內，晃動凍存管直至管中凍存細胞融化成液體； 2. 將溶解的細胞凍存懸液轉移至含有 5-10 倍體積完全培養基的離心管中，待凍存管中細胞完全融化后，將凍存細胞懸液緩慢加入離心管中，輕輕混勻； 3. 室溫 1000 rpm 離心 5 min； 去除上清液，加入已回溫的完全培養基重懸細胞，進行細胞計數，根據計數結果，取適量的細胞懸液接種到新的培養瓶內； 4. 將培養瓶轉移至 37℃，5% CO2 培養箱中，按常規方法培養。 |
| 注意事項 | 1. 試劑包裝如有破損或滴漏，嚴禁使用。 2. 請遵守嚴格無菌的工作規范，操作過程避免污染。 3. 使用前應詳細閱讀使用說明書，在有效期內使用。 ? 4. 本產品含有 DMSO，建議用戶在低溫條件下（4℃或冰上）進行操作，凍存細胞后應盡量減少凍存細胞在外存放時間，盡快按照步驟移入-80℃冰箱保存。 5. 部分對 DMSO 敏感的細胞，建議使用本產品前對其進行試驗性凍存、復蘇、培養，確認細胞性能后再進行正式凍存。 6. 該產品在室溫條件下放置的時間不宜過長，以免影響凍存效率。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | 2°C-8°C保存，有效期18個月。 |
