| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 1. MSC 成骨誘導完全培養基配制：室溫融化成骨誘導添加物 B，將融化的溶液加入人間充質干細胞成骨誘導基礎培養基中，充分混勻，2-8 ℃保存，有效期 1 個月。 2. 培養皿處理：加適量包被溶液到培養器皿中，輕輕搖動使其覆蓋整個培養器皿底面，室溫靜置30-60分鐘。棄去溶液 ，室溫晾干（包被液使用前必須進行室溫復溫。建議使用六孔板，每孔加包被溶液1 ml）。 3. 準備所需誘導分化的 MSC，當細胞融合達 85%左右時，用消化液消化細胞，并用 MSC 完全培養基重懸（MSC 完全培養基需自備）。 4. 按照2×104 cells/cm2的密度將細胞接種于已包被處理的六孔板中，每孔MSC完全培養基2 ml，37℃、5%CO2培養箱中培養（細胞密度為該試劑盒的標準密度，可根據實驗室情況進行調整）。 5. 當細胞融合達60%時，棄去培養上清，每孔添加MSC成骨誘導完全培養基2 ml/孔，37℃、5%CO2培養箱中培養。 6. 每3天更換新鮮的MSC成骨誘導完全培養基，持續培養2-4周。細胞狀態良好一般5天后培養液出現渾濁，鈣渾濁為鈣開始沉積，此時換液應盡量輕柔，避免將沉積的鈣棄掉；7-10天左右出現鈣沉積。一般2周內出現較大的較厚的鈣沉積，透光性變差。有些細胞鈣沉積出現較晚，一般不超過3周，超過3周未出現明顯沉積，請注意分析操作步驟與其他原因。可根據具體實驗需求選擇終止時間，但不易超過4周（具體時間請根據自己實驗室細胞等條件自行確定）。 7. 誘導培養結束時，棄去培養上清，DPBS洗細胞兩次，4%中性多聚甲醛溶液2 ml/孔室溫固定細胞20分鐘（培養結束時或中途可以選擇其他檢測方法，如基因表達檢測等）。 8. 棄去固定液，DPBS洗2次，加入茜素紅染液1 ml/孔染色15分鐘。 9. 棄去茜素紅染液，DPBS洗3次，添加新鮮DPBS。 10. 顯微鏡下觀察并拍照。 11. 結果判定：按照程序操作完畢，低倍鏡下觀察可見紅色著色點，此處為鈣結節，說明實驗所用的MSC具有成骨能力。否則，所使用的MSC無成骨能力。 |
| 注意事項 | 1、 成骨誘導后細胞易脫壁，換液時完全培養基必須經室溫復溫 30 分鐘。添加培養基時動作要輕柔，沿培養器皿側壁緩緩加入，切記避免吹起細胞。 2、 染色過程中一定要避免組織細胞被風干，風干會影響顯微觀察效果。 3、 如果試劑外包裝管出現裂縫，應立即停止使用。 4、 應嚴格按照貯存要求貯存，避免反復凍融。 5、 操作過程應在無菌環境下進行。必須保證操作過程中使用的所有容器及所有直接接觸細胞液的器具嚴格無菌。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
