| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 細胞傳代： 1. 37℃水浴預熱 CHO 無血清完全培養基； 2. 從培養箱中取出搖瓶，取少量細胞懸液進行細胞密度及活力檢測； 3. 按照密度為3-5×105/ml個細胞接種至新的搖瓶中，置于37℃、CO2含量為5%-8%的培養箱中，搖床( 振幅50mm,轉速110-120rpm）上培養。 4. 當活細胞密度≥4×106時進行傳代，使用新鮮CHO無血清培養基按3-5×105/ml重懸細胞，并將細胞接種至新搖瓶。 瞬時轉染： 1. 在瞬轉開始之前，細胞應完全適應CHO無血清培養基，CHO細胞生長狀態正常，傳代倍增時間穩定（一般18-24h），細胞活率維持95%以上，方可進行瞬轉測試。 2. 轉染時調整活細胞密度為5 x106 cells/ml（離心去掉舊培養液，改用新培養基最佳），邊搖邊加入3ug/mL質粒（搖勻很重要）。 3. 邊搖邊加入7ug/mL轉染試劑（搖勻很重要）。 補料表達： 1. 轉染后12-24h 加入0.5%的表達增強劑，并降溫至32℃培養。并在轉染后 Day1-3-5-7-9-11添加5%補料進行高密度高產量表達，葡萄糖按需添加。 2. 當細胞活率低于80%，培養結束，收取上清液，純化目標產物。 3.（培養過程中參數建議如下：初始培養溫度36.5℃，Day1溫度降低至32℃，pH:7.1±0.2，DO：40%。搖床轉速120rpm，振幅50mm, 5-8%CO2 ）。 |
| 注意事項 | 1. 液體細胞培養基應置于2～8℃避光保存。 2. 針對不同的細胞株，由于代謝或對營養物質的需求不同，需要針對性的優化補料量，以更 好的提高表達量。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 | CHO無血清培養基：2-8℃，避光儲存，有效期12個月； CHO添加物：-20℃儲存，有效期12個月。 |
