細(xì)胞來(lái)源
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells）HUVEC來(lái)源于新生兒臍帶靜脈血管的內(nèi)皮，具有典型的“鵝卵石”狀形態(tài)。
HUVEC細(xì)胞常用于血管生成等相關(guān)的研究。（百迪細(xì)胞庫(kù)產(chǎn)品貨號(hào)：C5192）
生長(zhǎng)特性：
HUVEC為貼壁細(xì)胞、呈內(nèi)皮細(xì)胞樣，具有典型的“鵝卵石”狀形態(tài)。
原代HUVEC細(xì)胞在體外生長(zhǎng)緩慢，傳代次數(shù)有限。
細(xì)胞在傳代過(guò)程中很難保持穩(wěn)定狀態(tài)，隨著傳代次數(shù)增多，細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）的表達(dá)逐步下降。
圖片來(lái)源：ATCC
培養(yǎng)細(xì)節(jié)：
① 培養(yǎng)瓶包被：
細(xì)胞培養(yǎng)前，細(xì)胞瓶要用包被液進(jìn)行包被，置于37℃培養(yǎng)箱中至少2小時(shí)或過(guò)夜；包被完成后吸出包被液即可接種細(xì)胞；稀釋后的包被液(可4℃保存一周)可回收使用一次。包被液可促進(jìn)細(xì)胞貼壁及生長(zhǎng)。
包被液推薦使用重組人纖連蛋白包被液。
② 細(xì)胞復(fù)蘇：
細(xì)胞復(fù)蘇后16小時(shí)內(nèi)不要干擾培養(yǎng)，第二天更換以去除殘留的DMSO和未附著的細(xì)胞，一般推薦在18-24小時(shí)內(nèi)換液。此后每2-3天更換一次，直到細(xì)胞融合至70%左右，狀態(tài)較好的情況下會(huì)形成鵝卵石或紡錘形形態(tài)、無(wú)顆粒細(xì)胞質(zhì)，一旦細(xì)胞量達(dá)到70%，每隔一天更換培養(yǎng)基，直到細(xì)胞融合至90%左右。
③ 細(xì)胞清洗：
一般推薦使用不含鈣鎂離子的DPBS（貨號(hào)：L204-500）進(jìn)行清洗。
④ 細(xì)胞消化：
該細(xì)胞消化時(shí)，胰酶濃度不宜過(guò)高，否則會(huì)影響細(xì)胞外的標(biāo)志物，一般推薦的胰酶濃度為0.05%（貨號(hào)：A302-500）。該細(xì)胞對(duì)消化較為敏感，消化時(shí)應(yīng)避免消化過(guò)度，一般消化時(shí)間為3-4min，注意觀察細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞變圓變亮?xí)r即可加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
⑤ 細(xì)胞分散：
該細(xì)胞尤其脆弱，吹打時(shí)不可用力過(guò)大。吹打應(yīng)使用粗口槍頭或粗口膠頭滴管，輕柔吹打10-20次直至細(xì)胞顆顆分明即可。
⑥ 細(xì)胞傳代：
細(xì)胞推薦1:2傳代，傳代后16小時(shí)內(nèi)不要干擾培養(yǎng)，18小時(shí)后換液，此后隔天換一次液，細(xì)胞生長(zhǎng)不能過(guò)密，一般融合至80%-90%時(shí)即可操作。
⑦ 細(xì)胞凍存：
推薦凍存配方為90% FBS+10% DMSO。
注意
該細(xì)胞為原代細(xì)胞，傳代次數(shù)有限。細(xì)胞傳代比例過(guò)高或傳代次數(shù)過(guò)多、以及反復(fù)凍存都會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)，加速細(xì)胞老化，建議從實(shí)驗(yàn)開始一直1:2培養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
圖片來(lái)源：百迪細(xì)胞庫(kù)
Q&A：
問(wèn)題一 HUVEC不貼壁怎么辦？
首先細(xì)胞瓶一定要包被，包被液可提高細(xì)胞貼壁效果；
其次培養(yǎng)基中要添加HUVEC細(xì)胞生長(zhǎng)因子；
然后不能消化過(guò)度，HUVEC消化過(guò)程中可能會(huì)出現(xiàn)第一層細(xì)胞下來(lái)了，還有一層細(xì)胞還在“頑強(qiáng)貼壁”中，此時(shí)可分兩次進(jìn)行消化。
問(wèn)題二 HUVEC出現(xiàn)多角形、觸角怎么辦？
一般出現(xiàn)這種情況就得看看培養(yǎng)體系是否合適了，培養(yǎng)基的酸堿度是否合適，一般推薦pH 7.0-7.2左右；
還有就是該細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量要求較高，盡可能使用進(jìn)口血清；
細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，還需添加細(xì)胞生長(zhǎng)因子，提供細(xì)胞狀態(tài)。推薦使用HUVEC專用完全培養(yǎng)基。
